<div dir="ltr">This sounds good to me. Glad to hear the proteins were not damaged by the elevated temperature storage conditions. We will commence our studies using the samples you provided. The last thing we need to know is what the EDTA concentrations in the buffer are of the samples you provided to us.<div><br></div><div>-Borries</div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Thu, Sep 7, 2023 at 10:55 AM Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu">vcontic@emory.edu</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex"><div class="msg401497480420371704">




<div dir="ltr">
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Hi Reece. The samples should be good since the proteins are thermostable, that is, from a hyperthermophilic organism even though expressed in E. coli. Andres can answer the first part of your question regarding the buffers since he prepped the samples. For
 the initial experiments in the presence of calcium, the samples should be incubated at ambient temperature in the presence of calcium ion, probably for an hour. CanA might not oligomerize under these conditions, while the Hyper2 sample should. If the initial
 calcium experiments do not demonstrate oligomerization, the Hyper2 sample can be incubated for 24 hours at ambient temperature. I would not heat the Hyper2 sample since it might rapidly polymerize (based on our experience). With regard to the CanA sample,
 I would suggest using the 10 mM or maybe 20 mM calcium ion concentration at higher temperature. If we wanted to detect the presence of oligomers, we might not want to heat the sample to higher temperatures (typically we use 80C for filament formation followed
 by cooling to ambient to induce polymerization).I think that 37 degrees is a good compromise. Would you run the instrument with the sample at 37 or incubate at 37 and run the sample at ambient? If the latter, it may be best to start out at 1 hr incubation
 at elevated temp. Best, Vince</div>
<div>
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div id="m_401497480420371704Signature">
<div>
<div id="m_401497480420371704divtagdefaultwrapper" style="font-size:12pt;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">
<div><font size="2"><span style="font-size:10pt">
<div>Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>
Professor<br>
Department of Chemistry<br>
Emory University</div>
</span></font></div>
</div>
</div>
</div>
</div>
<div id="m_401497480420371704appendonsend"></div>
<hr style="display:inline-block;width:98%">
<div id="m_401497480420371704divRplyFwdMsg" dir="ltr"><font face="Calibri, sans-serif" style="font-size:11pt" color="#000000"><b>From:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" target="_blank">reece.martin@uleth.ca</a>><br>
<b>Sent:</b> Wednesday, September 6, 2023 7:11 PM<br>
<b>To:</b> Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" target="_blank">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>; Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" target="_blank">vcontic@emory.edu</a>><br>
<b>Cc:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" target="_blank">demeler@gmail.com</a>>; <a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" target="_blank">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" target="_blank">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>
<b>Subject:</b> [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</font>
<div> </div>
</div>

<div dir="ltr">
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Hi Vince and Andres,</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Considering that the samples arrived at room temperature (the exact length of time is unknown), and that an ice pack leaked (the samples appear to have been sealed properly). We are just looking to confirm that you feel it is worth continuing to process this
 batch of samples, taking into account your insight into the temperature-stability of the proteins at ambient temperature. <span style="color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255);display:inline"></span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
If so, as per the updated experimental design in the LIMS, we will start out running both<span style="color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255);display:inline"><span> </span>CanA and Hyper2</span> at a high and low concentration in the
 EDTA-containing buffer at 20 degrees Celsius. To accomplish this, I need to know w<span style="color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255);display:inline">hat buffer each of the protein stocks are in and whether
 or not they contain EDTA.  </span> </div>
<div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt"><br>
</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">If this experiment is successful, we will repeat in the presence of calcium ions (10mM for CanA, and 1mM for Hyper2). For this we need to know at what temperature and for how long
 the samples should be incubated with the CaCl2 solution. Finally, if this experiment is successful, we will look at repeating with increased calcium ion concentrations, as well as running at a higher temperature such as 37 degrees Celsius.</span><br>
</div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt"><br>
</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt">I'll report back on the results from the first run, which will take place this week.</span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div id="m_401497480420371704x_Signature">
<div>
<div>
<div dir="ltr" style="margin:0px"><font face="Calibri, Helvetica, sans-serif"><span style="font-size:12pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0)">Cheers,</span></font></div>
<div dir="ltr" style="margin:0px"><br>
</div>
<div dir="ltr" style="margin:0px"><span style="font-size:12pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0)">Reece</span></div>
<div dir="ltr" style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:15px;margin:0px;color:rgb(50,49,48)">
<span style="margin:0px"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="margin:0px"><span><span style="font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:9pt;background-color:rgb(255,255,255)"><br>
</span></span></span></font></span></span></span></div>
<div dir="ltr" style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:15px;margin:0px;color:rgb(50,49,48)">
<span style="margin:0px"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="margin:0px"><span><span style="font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:9pt;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">--</span></span></span></font></span></span></span></div>
<div dir="ltr" style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:15px;margin:0px;color:rgb(50,49,48)">
<span style="margin:0px"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="margin:0px"><span><span style="font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:9pt;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)"></span></span></span></font></span></span></span></div>
<div dir="ltr" style="font-size:15px;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:rgb(255,255,255)">
<span style="margin:0px"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="margin:0px"><span style="margin:0px"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">Reece
 Martin,</span><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)"> </span></span><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">B.Sc</span></span></font></span></span></span>
<div style="margin:0px;background-color:white"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="margin:0px"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">M.Sc.
 Candidate</span></span></font></span></span></div>
</div>
<div style="font-size:15px;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:white">
<span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">Northwest
 Biophysics Consortium</span></font></span></span></div>
<div dir="ltr" style="font-size:15px;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:white">
<span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">Alberta
 RNA Research and Training Institute (ARRTI)</span><span style="margin:0px"><br>
</span></font></span></span></div>
<div dir="ltr" style="font-size:15px;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:white">
<span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">Lab
 of Dr. Borries Demeler</span></font></span></span></div>
<div dir="ltr" style="font-size:15px;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:white">
<span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">Department
 of Chemistry and Biochemistry</span><span style="margin:0px"><br>
</span><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">University of Lethbridge</span><br>
</font></span></span></div>
</div>
<div><span dir="ltr" style="font-size:15px;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:white"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">Email:</span><span style="margin:0px"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)"> reece.martin</span></span><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">@<a href="http://uleth.ca" target="_blank">uleth.ca</a></span></font></span></span></span></div>
<div><span dir="ltr" style="font-size:15px;font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:white"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="font-size:9pt;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;margin:0px;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">Phone:
 403-498-5882</span></font></span></span></span><span dir="ltr" style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;font-size:15px;margin:0px;color:rgb(50,49,48);background-color:white"><span style="font-family:verdana,sans-serif;margin:0px"><span style="margin:0px;color:black"><font size="1"><span style="margin:0px;font-family:Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:9pt;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)"></span></font></span></span></span><br>
</div>
</div>
</div>
</div>
</div>
</div>

</div></blockquote></div>