<html>

<head>

<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=utf-8">

<style type="text/css" style="display:none;"> P {margin-top:0;margin-bottom:0;} </style>

</head>

<body dir="ltr">

<div class="elementToProof" style="font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif;">Hi Vince and Andres,</span></div>

<div class="elementToProof" style="font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif;"><br>

</span></div>

<div class="elementToProof"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">      My apologies for the delay. We are down to one functioning AUC, so instrument time is hard to come by.  As mentioned before, I

 ran both proteins at low concentrations (~10 μM) with Hyper2 incubated for one hour at ambient temperature with 1mM Ca2+, and CanA incubated for one hour at 50 degrees Celsius with 20mM Ca2+. I then spun at 3000 rpm at ambient temperature. The results appear

 to show the vast majority of the species pelleted to the bottom of the cell before the instrument began scanning. This would imply that polymerization did indeed occur, however the polymers were so large that they pelleted much too quick to catch them. This

 suggests that we may struggle to collect meaningful sedimentation data on the proteins. I would like to try and run them at 4 degrees Celsius to slow down the sedimentation (although I don't believe this will fix this issue entirely), while also using lower

 calcium concentrations, and a short incubation time (say 30 minutes). With the hope of at least trying to catch some of the species while they are in the process of polymerizing. Let me know how this sounds.</span></div>

<div class="elementToProof" style="font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif;"><br>

</span></div>

<div class="elementToProof" style="font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif;">Cheers,</span></div>

<div class="elementToProof" style="font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif;"><br>

</span></div>

<div class="elementToProof" style="font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif;">Reece</span></div>

<div id="appendonsend"></div>

<hr style="display: inline-block; width: 98%;">

<div id="divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Martin, Reece <reece.martin@uleth.ca><br>

<b>Sent:</b> 16 November 2023 1:03 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <vcontic@emory.edu>; Gonzalez Socorro, Andres <andres.gonzalez.socorro@emory.edu><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <demeler@gmail.com>; demelerlab@biophysics.uleth.ca <demelerlab@biophysics.uleth.ca><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Vince,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

No worries, this sounds like a good plan. I will update you next week with the results of the run.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Cheers,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Reece</div>

<div id="x_appendonsend"></div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Conticello, Vincent <vcontic@emory.edu><br>

<b>Sent:</b> 15 November 2023 12:25 PM<br>

<b>To:</b> Martin, Reece <reece.martin@uleth.ca>; Gonzalez Socorro, Andres <andres.gonzalez.socorro@emory.edu><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <demeler@gmail.com>; demelerlab@biophysics.uleth.ca <demelerlab@biophysics.uleth.ca><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to phishing@uleth.ca.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Reece. Sorry for the delay in response. I needed to discuss with Andres and then take some time to consider your email. It's a bit busy now since the semester is nearing the end. I think that your idea to repeat the experiment at a lower speed is a good

 one. I am not sure about how low the speed should be. It seems that we either observe monomer (directly) and polymer (indirectly). My guess is that once nucleation occurs that polymerization may take off. I think that it would be worthwhile to repeat the experiment

 spinning more slowly. The only change that I would make would be to incubate Hyper2 with only 1 mM Ca for 1 hour. The higher 5mM concentration may promote a higher level of aggregation. I think that 1 mM Ca might be sufficient based on Andres earlier results.

 Please let me know if you have any further questions. Regards, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_Signature">

<div id="x_x_divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_appendonsend"></div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Martin, Reece <reece.martin@uleth.ca><br>

<b>Sent:</b> Thursday, November 2, 2023 8:27 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <vcontic@emory.edu>; Gonzalez Socorro, Andres <andres.gonzalez.socorro@emory.edu><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <demeler@gmail.com>; demelerlab@biophysics.uleth.ca <demelerlab@biophysics.uleth.ca><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt;">Hi Vince,</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt;"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">      Under the conditions mentioned in my previous email (</span><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; font-weight: 400; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">CanA</span><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; font-weight: 400; color: black; background-color: white;"> incubate

 at 50 degrees Celsius with 20mM calcium ion concentration for an hour. Hyper1 incubated at ambient temperature with 5mM calcium ion concentration for an hour. Both</span><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 16px; font-weight: 400; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);"> spun

 at ambient temperature and</span><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; font-weight: 400; color: black; background-color: white;"> 45000 rpm). A comparison of the OD readings from the UV/Vis spectrophotometer

 before calcium ion incubation (corrected to the 1.2 cm pathlength used in the AUC) to the OD readings from the AUC after calcium ion incubation is shown in the attached spreadsheet image. The OD drop after the one hour incubation at ambient temperature is

 likely indicative of some sort of association occurring. Although, the data collected over the course of the AUC experiment appears to only show the presence of the monomer (and potentially some degradant products, see attached distribution plot). This appears

 to indicate that species likely formed during the incubation that sedimented rapidly as the instrument spun up, hence why they did not appear in the data collected. After the experiment concluded, I shook up these cells and observed partial cloudiness in the

 solutions. This, in tandem with scattering (absorbance above 300 nm) observed in the UV/Vis spectrophotometer indicates that there is some kind of large-scale association occurring. Of course, since we did not observe these species in the AUC experiment, we

 can't be certain if this was polymerization or uncontrollable aggregation and precipitation. I then tried re-running these cells at 14200 rpm (with the intention of catching these larger species), however, at this point I observed even more cloudiness when

 looking at the cells. The AUC data showed an even more significant drop in OD of roughly 65% across each cell, and the minimal sedimentation pattern observed at this speed was consistent with finite element simulations of the monomeric units of the proteins.

 I believe from this that given the extended time between the calcium addition and this second run that there was likely large-scale aggregation, so this doesn't necessarily rule out our ability to catch the polymers in the initial stages of polymerization

 at this lower speed. </span></div>

<div style="direction: ltr;"><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; font-weight: 400; color: black; background-color: white;"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr;"><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; font-weight: 400; color: black; background-color: white;">      With all of this in mind, I can use the following conditions: Low

 concentration </span><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; font-weight: 400; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">CanA</span><span style="letter-spacing: normal; font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; font-weight: 400; color: black; background-color: white;"> incubated

 at 50 degrees Celsius with 20mM calcium ion concentration for an hour. Low concentration Hyper1 incubated at ambient temperature with 5mM calcium ion concentration for an hour (or 1mM calcium ion concentration for twenty four hours). Then spin at ambient temperature

 and 14200 rpm, or an even lower speed (we can go down to 3000 rpm). This way we can hopefully catch those larger species, even if they are still associating during the course of the run. Outside of this, it may be of interest to perform some dynamic light

 scattering experiments to measure the change in intensity of the light scattered over a relevant time-scale so we can get a handle on the rate of association. This could also help inform on the rough extent of polymerization occurring, since the proteins may

 be polymerizing to an extent on the time scale of a one-hour incubation that makes them extremely challenging to measure via AUC. Let me know how you would like to proceed.</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt;"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt;"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt;">Cheers,</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt;"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt;">Reece</span></div>

<div id="x_x_x_appendonsend"></div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Conticello, Vincent <vcontic@emory.edu><br>

<b>Sent:</b> 02 November 2023 8:48 AM<br>

<b>To:</b> Martin, Reece <reece.martin@uleth.ca>; Gonzalez Socorro, Andres <andres.gonzalez.socorro@emory.edu><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <demeler@gmail.com>; demelerlab@biophysics.uleth.ca <demelerlab@biophysics.uleth.ca><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to phishing@uleth.ca.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Reece. Just following up on progress on the AUC analysis. I have been traveling and writing a proposal. After I catch up on backlogged work, I hope to turn back to finishing up the manuscript. Regards, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_Signature">

<div id="x_x_x_x_divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_appendonsend"></div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Conticello, Vincent <vcontic@emory.edu><br>

<b>Sent:</b> Saturday, October 7, 2023 10:16 AM<br>

<b>To:</b> Martin, Reece <reece.martin@uleth.ca>; Gonzalez Socorro, Andres <andres.gonzalez.socorro@emory.edu><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <demeler@gmail.com>; demelerlab@biophysics.uleth.ca <demelerlab@biophysics.uleth.ca><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Reece don't bother with terbium. Our previous studies indicated that, even at low concentration, terbium addition promotes uncontrollable aggregation and precipitation. The rest of the plan is sound. Regards. Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_Signature">

<div id="x_x_x_x_x_divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_appendonsend"></div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Martin, Reece <reece.martin@uleth.ca><br>

<b>Sent:</b> Friday, October 6, 2023 6:58 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <vcontic@emory.edu>; Gonzalez Socorro, Andres <andres.gonzalez.socorro@emory.edu><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <demeler@gmail.com>; demelerlab@biophysics.uleth.ca <demelerlab@biophysics.uleth.ca><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Vince and Andres,</div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);"><span style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif;"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

I will look into acquiring some Terbium (III), as I don't believe that our lab is currently in possession of any. For CanA, I will<span style="font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; background-color: rgb(255, 255, 255);"> incubate

 at 50 degrees Celsius with 20mM calcium ion concentration for an hour and then run at ambient temperature</span>. As Bo mentioned for Hyper2, I can gradually increase the calcium ion concentration (in an increment you feel would be acceptable) and find the

 critical concentration. Bo, the cells aren't currently assembled, but I can easily reassemble them for any incubation steps we need.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Cheers,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Reece</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_appendonsend"></div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Borries Demeler <demeler@gmail.com><br>

<b>Sent:</b> 06 October 2023 4:42 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <vcontic@emory.edu><br>

<b>Cc:</b> Gonzalez Socorro, Andres <andres.gonzalez.socorro@emory.edu>; Martin, Reece <reece.martin@uleth.ca>; demelerlab@biophysics.uleth.ca <demelerlab@biophysics.uleth.ca><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to phishing@uleth.ca.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">Hi Vince,</div>

<div style="direction: ltr;">I checked the sedimentation patterns very early in the experiment, and we get the same OD we expected to get, and there is absolutely no indication that there is anything faster in the sample than the species shown in Reece's plot,

 so the short of it is that there is nothing oligomerizing under these conditions, and the sample is exceptionally stable (as was shown already earlier when the sample behaved remarkably well when shipped without ice :)</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">So my suggestion is to gradually increase Ca2+ to see if there is a critical concentration where this happens. The other thing we can do is to incubate the samples at 37C and see if there is a change afterwards. Reece, do you still

 have the cells built? We could just shake them up and leave them for an extended period of time in the rotor equilibration stage, but set the temperature to 37C. 40C is the max temperature we can do in the instrument, but perhaps there is a 50 C incubator

 somewhere, Reece could check if you insist on 50C.</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">-Borries</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Fri, Oct 6, 2023 at 1:19 PM Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="OWA01cc8081-942b-b4ff-1ce4-0e3ac3bf8612" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>> wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi, All. I have been busy writing an exam today for a grad course that I am teaching. I am following up on Andres' remarks. It is strange that the 1 mM Calcium ion did not induce assembly of Hyper2, at least compared to Andres' previous experiments. Could it

 be that some very large species were formed that immediately sedimented? I guess that these species, if they existed, would be visible in the early stages of the experiment. Adding 10 mM Calcium to Hyper2 usually causes immediate precipitation at higher concentration.

 You could try it-maybe it would not occur at the lower protein concentrations at which you are working. I would think that if incubation for 24 hr with 1 mM Ca caused oligomerization that you would seen its effect over the course of the AUC runs. For CanA,

 I think that heating to 50C for an hour in the presence of Ca should be fine. Once oligomerization occurs, it is unlikely to be reversible. Regards, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943appendonsend"></div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="OWA223fab17-af56-4d58-6205-68b6d5fa3267" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Sent:</b> Friday, October 6, 2023 10:55 AM<br>

<b>To:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="OWAd60c6285-b5fe-83dd-2cd0-afc3112541d4" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>; Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="OWAcd51e029-2ff1-69e6-4847-430439d896b3" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>><br>

<b>Cc:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="OWAc5073c20-6fec-4cd9-c754-d71f0a2fc750" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="OWAbfcea11c-d902-d0e4-bd43-408092b486e8" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="OWA1e4834c4-cc4a-a477-762f-90bf56db8cf2" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr;">Hello all,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

We expected CanA to not polymerize at room temperature with calcium ions. Previous findings suggest that it needs at least 50C incubation for around 1 hour. However, for Hyp2 it was surprising to not see any polymerization. Through TEM I observe tubes when

 incubated with 1mM Ca at room temperature. I think we could try adding 10mM Ca instead (which causes rapid polymerization) or incubating it for 24hr as previously mentioned. I was wondering if it is a good idea to include a positive control. Terbium (III)

 causes polymerization almost immediately so it should show a great change in the sedimentation coefficient. What are your thoughts?</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Thanks for the update!</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Best,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Andres</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_divRplyFwdMsg" dir="ltr"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="OWAe4f3bf29-ae08-c055-33e1-8291cd6decd5" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Sent:</b> Thursday, October 5, 2023 8:07:49 PM<br>

<b>To:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="OWA45a59e70-497c-8f16-0af8-339a37cf8b14" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>><br>

<b>Cc:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="OWAb7076e2a-5914-aa06-2003-f7944f4fd185" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>; Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="OWAf3976e94-4e5d-412f-b9e2-801cd626b910" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="OWAb0498781-ff91-adad-8cc8-a07a672ce272" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="OWAe89abdbd-2b54-0144-d9ea-9e752238286c" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr;">Hey guys,</div>

<div style="direction: ltr;">Reece is spot on - there is no change.</div>

<div style="direction: ltr;">Nice work, Reece! Vince, what's your next step?</div>

<div style="direction: ltr;">-Borries</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Thu, Oct 5, 2023 at 5:41 PM Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAaa15fb13-2efa-1ec0-88ed-f6a2f4d2236e" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>

 wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Vince and Andres,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

      I have analyzed the results from the one-hour incubation with calcium ions (<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">20 mM for CanA and 1mM for Hyper2)

</span>at ambient temperature. In order, the four images attached are as follows: CanA High concentration (35.4 μM), CanA Low Concentration (8.3

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">μM), Hyper2 High Concentration (33.9 μM), and Hyper2 Low Concentration (10 μM). Within each plot, the red trace shows the results from the run with no calcium ions present, while the green trace shows the

 results from the run with the one-hour incubation with calcium ions at ambient temperature. Therefore, each plot compares a specific concentration of each protein before and after calcium ion incubation. As no significant shift in sedimentation coefficient

 values were observed, this would imply that none of the species underwent polymerization, at least to an extent that the instrument could detect. Despite this, both proteins thankfully still appear to be intact. In an earlier email you suggested that we could

 try incubating Hyper2 at ambient temperature for twenty-four hours, and then spin at ambient temperature again. For CanA, you suggested a one-hour incubation at thirty-seven degrees Celsius followed by spinning at thirty-seven degrees Celsius. Let me know

 how these next steps sound, and we can go from there.</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);"> Cheers,</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">Reece</span></div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA90b58586-c170-9ea7-6dd2-8df4afd2a199" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr;"><span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>Sent:</b> 02 October 2023 2:18 PM<br>

<b>To:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA93f26210-1770-4547-b523-b30313d9aa8b" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>; Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA367c5b86-2c96-1443-e56f-dc729cebbc12" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA0fcda594-399d-88c5-86ed-9ed0f45e4f99" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA2aaf0f31-6d6f-eccc-6a7d-68c327fa6aa3" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAa4ba3d35-851c-b017-5daa-a5a1b5ca85fd" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span></div>

<div style="direction: ltr;"> </div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to

<a href="mailto:phishing@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAc3623bf1-a304-d91c-9203-f926c9a001b7" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;">

phishing@uleth.ca</a>.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

OK, Reece. Thanks for the update. Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA3f5beb73-15e6-0944-4106-062629ccfe07" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>><br>

<b>Sent:</b> Thursday, September 28, 2023 12:54 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA032dd79e-0c0d-967c-9c58-28a6cf0c6e76" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>; Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA69ad883a-9571-0c1f-3883-a3853def5fba" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAe0b442e0-db10-f503-eafb-3313f5f6bc23" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAbb12b124-5dd7-543b-82a3-8975fd5593f2" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA970155e0-df18-87d1-d3d6-0411fc16b538" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi all,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

I have completed the experiment with the ambient temperature calcium ion incubation. I am currently working on processing and analysing the data. I will report back next week with the results, and we can decide how we would like to proceed from there.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Cheers,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Reece</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAa3ed2d51-c31e-5163-4699-232a3759352b" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Sent:</b> 23 September 2023 10:49 AM<br>

<b>To:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA657cb979-fbe1-dd65-8320-85cb99a932b0" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>; Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAd8e36b95-acb4-bbc5-fc32-4e44394cca7a" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA6859028f-ca01-8423-fe84-15c30a554b7f" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA1ab02b5f-5810-8355-f5f3-18121503c85c" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAdb9c4d18-a00d-89d2-8ac0-402e947c9f33" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to

<a href="mailto:phishing@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA37264be7-b215-c3d8-8cca-52b6d10ae609" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;">

phishing@uleth.ca</a>.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Reece. This sounds great. Regards, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA074c3d2a-2ea5-e69d-da5e-35f4ad4e6bb0" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>><br>

<b>Sent:</b> Friday, September 22, 2023 6:07 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAaf877edc-326f-6a08-f67d-408a6a62a8af" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>; Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA44fe69e1-08fb-0b67-18c5-91706f40c7df" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA7cc05f55-1b6c-77c9-8761-d23ecb49cc43" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAf3559400-7b05-f51e-3b25-5864591add2d" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA11c4c7ff-1745-82de-d092-2b3644e51eeb" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi all,</div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);"><span style="font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif;"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

      As Bo mentioned, the first AUC run of both proteins with no calcium ions appears to show that both proteins are still intact and have not aggregated (or polymerized). I am happy to report that the models look good, the RMSDs are fairly low, and the results

 seem to indicate homogeneity of the protein samples. For the next run I will load the proteins [CanA High conc. (35.4 μM), CanA Low conc. (8.3

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">μM</span>), Hyper2 High conc. (33.9

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">μM</span>), and Hyper2 Low conc. (10

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">μM</span>)] under ambient conditions with the calcium ions (20 mM for CanA and 1mM for Hyper2), program the instrument to incubate the samples for one hour at 20 degrees Celsius before spinning, and then perform

 the AUC experiment at 20 degrees Celsius. Let me know how this sounds. I will report back once I have the results next week. </div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Cheers,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Reece</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA3719f3f1-6e3c-9881-6c88-f1cc86eaef69" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Sent:</b> 22 September 2023 5:56 AM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAc2a34a10-1af4-d8e6-f24d-a6ffeaac6048" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA2d94c0a0-1e09-39e6-8f4b-34ed6c9c673f" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>; Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAd9050023-1fb8-bb3d-764f-c40f2ad39607" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA051879aa-79d8-7d07-c50f-8315f2ee5ef5" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWA7c56686f-acce-f314-aaa2-ba02801f9b9a" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to

<a href="mailto:phishing@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943OWAbfaafb57-3fd6-bc5e-ff57-e9bd79bfb8f7" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;">

phishing@uleth.ca</a>.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">Yes, Vince, there is good news! Reece analyzed the samples we received from you and despite all the complicating factors, they did not show any aggregation. What experiment would you like us to run next? Adding Ca++ or temperature

 incubation?</div>

<div style="direction: ltr;">-Borries </div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Fri, Sep 22, 2023, 05:42 Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA3ac91d99-7a4d-7de9-8ffb-04ce2c3f0d89" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>

 wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Borries and Reece. I am just following up to see if any further information is needed and if it is OK to proceed with the initial AUC runs. Thanks, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAe5f3d485-5220-9209-62a2-56473ea78347" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Sent:</b> Saturday, September 16, 2023 1:59 PM<br>

<b>To:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAecb45db9-d367-0942-b5ba-a2d77cb3876f" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Cc:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA81c6984b-9000-72e7-7558-d0f09e6b0ac5" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>; Gonzalez

 Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA4c2607ab-081b-a6a7-61a2-1fa5531fc562" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA29b8957b-b4eb-f130-a56b-a30eeb38faaa" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA0deab4ec-abd1-2411-066a-974af69275a9" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

OK. Sounds like a good control experiment. Best, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA11a8d6de-04e3-8feb-87a8-63636ab56b5e" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Sent:</b> Saturday, September 16, 2023 12:37 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAc01668ef-1cf6-9b63-97dc-6fceb1da6867" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAf3ae21e7-a3d4-eb17-3fba-42ec4d0cfeab" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>; Gonzalez

 Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA9dcd6a0a-0c23-6af7-6504-d61eb66d779a" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA4f915876-c466-0577-ae95-2427fa328ad7" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAa7d709c1-e1d7-de19-9d02-2ec53a30ab1c" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr;">Vince et al:</div>

<div style="direction: ltr;">We could run the buffer by themselves to see if the contaminants are just small molecules or something bigger like a protein or DNA fragment.</div>

<div style="direction: ltr;">This way we would have some idea about where this background comes from. Maybe there is something growing in the buffer, or even leaching out from the tubes in which they were stored? Small molecules would not sediment, just give

 an absorbing background.</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">-Borries</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Fri, Sep 15, 2023 at 1:11 PM Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAc2eb9c66-9104-4dd4-e7b5-90c1ce060cab" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>

 wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi All. Andres and I spoke about this issue. We checked the UV-Vis of the buffers that he had made. The EDTA-free buffer does seem to have some contamination, while the EDTA-containing buffer seems much lower. I am not sure if Reece plans to check the spectra

 of the protein solutions or has done so yet. Andres and I thought that it would be best to proceed forward with the AUC analysis of the pure protein samples (CanA and Hyper2) and then make a decision based on the results of whther the calcium studies should

 be attempted. Is this agreeable? Best, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAf4d5f2ef-b858-6705-9f79-e86506cbab9b" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Sent:</b> Thursday, September 14, 2023 7:33 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA2e47224b-2db4-fa13-f18f-3dde91ccef27" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA82f909b2-ea82-0094-6110-7db1cd396e88" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>; Gonzalez

 Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAffa04e91-9b19-a2b0-2a10-365bca52388b" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAa7aaad53-f0b3-e432-c900-ceb41ae4be61" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA81c3123a-8112-9d7c-6d47-4f5bf64992ba" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr;">Hi Vince,</div>

<div style="direction: ltr;">protein (280 nm) and DNA (260 nm) absorbance are just one of many possibilities for the source of the spectral properties of your buffer. When we use spectrally pure TRIS or phosphate to make buffers they have a completely flat

 absorbance at wavelengths > 215 nm. So I am not sure where your buffers picked up the contaminating spectral contributions. If you recall, the samples arrived at RT and the gel packs had leaked over the samples and buffer tubes. I am sure Reece was careful

 not to contaminate the buffers with the leaked gel material, but all in all the shipping condition was less than ideal. You better check your buffer stocks, maybe that will help identify the source of the contamination.  The absorbance spectrum of the -EDTA

 buffer is definitely of concern. </div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">We need to know if we should proceed with the experiments under these conditions. As Reece correctly notes, there is a good chance that whatever is contaminating the buffer will sediment with a different s-value than the proteins

 of interest, but there is a question if the proteins are useful once exposed to contaminants. </div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">Thanks, and sorry for the bad news.</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">-Borries</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Thu, Sep 14, 2023 at 5:01 PM Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAada9d390-afac-6839-404e-ea11d21550fb" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>

 wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr;">Thanks Reece. I will discus with Andres but it is difficult to fathom how the buffers become contaminated with DNA and protein. Regards, Vince<br>

<br>

</div>

<div style="direction: ltr;">Sent from my iPad</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<blockquote>

<div style="direction: ltr;">On Sep 14, 2023, at 6:16 PM, Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA30e34c2f-d84f-d376-b524-4415fd6758a1" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>

 wrote:<br>

<br>

</div>

</blockquote>

<blockquote>

<div style="direction: ltr;"></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Vince and Andres,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

      Please see the attached UV/Vis spectrophotometer scans, which were <span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">

performed against a blank of water</span>. First is the low salt buffer with EDTA, which appears to have nucleic acid contamination. Second is the low salt buffer with no EDTA, which appears to have both nucleic acid and protein contamination. Of course, the

 proteins are in the EDTA-containing buffer, so this is the one we would be proceeding with. I, of course, have not been able to collect scans of the stock protein samples in a reasonable OD range for the spectrophotometer, so I cannot yet say whether they

 experience the same nucleic acid contamination.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

      My question is whether you would like us to proceed with preparing the samples in the contaminated EDTA-containing buffer. I should note that the nucleic acid contamination should not pose too much of an issue for this experiment. Especially as the nucleic

 acid contaminant only contributes roughly 0.05 OD at 280 nm according to the spectrum, and would likely sediment different than the proteins, depending on the hydrodynamic properties of the contaminant.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Cheers,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Reece</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Demelerlab <<a href="mailto:demelerlab-bounces@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA18449a76-6379-04d3-9bce-b4ef891011e9" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab-bounces@biophysics.uleth.ca</a>>

 on behalf of Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA7ec1b0ae-d5fb-4923-8f9c-7a677c9480ee" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Sent:</b> 09 September 2023 2:14 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA6cb8134a-36b9-590c-7ff4-7875a15ef701" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> <a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA08a1a226-fe74-39b7-9d31-fc198884ba98" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA7a94e87f-e33e-c394-20e0-e7ec0b325de2" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>>;

 Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAd0665c69-b074-912b-e689-eeb0771a039a" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [Demelerlab] [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to

<a href="mailto:phishing@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA50f5c307-fbe6-d071-34b0-283a6076028e" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;">

phishing@uleth.ca</a>.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">Hi Vince,</div>

<div style="direction: ltr;">since we collect data typically over 12-15 hours, especially for smaller proteins or peptides, it will be possible to selectively look at early, middle and late data, to identify trends and get some idea about the time dependence.

 Since we don't know what the answer will be, I am confident we can find out by simply doing the experiment. I just wanted everyone to be aware of the potential limitations of AUC for such a sample.</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">Thanks, -Borries</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Sat, Sep 9, 2023 at 2:00 PM Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA790cfb07-efac-7033-1e5c-a95639dadf01" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>

 wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Borries. Yes, I understand what you and Reece are saying. I doubt that these polymerization processes operate under thermodynamic control, i.e., relax to equilibrium at a given temperature after a suitable time period. In related bacterial systems, it is

 clear that polymerization is kinetically irreversible. However, the kinetics of assembly are slow . Those systems are a bit different in that the normal polymerization process is catalyzed by another protein rather than by metal ion addition. The idea would

 be to trap, at least on the time frame of the AUC analysis, some early intermediates in the process to gain insight into their hydrodynamic properties.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA42f0f027-292e-44cf-cbee-982dda3e2465" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Sent:</b> Friday, September 8, 2023 12:31 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA6a52f77d-608f-0ed1-7b8b-cad876cdd4c2" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA2be56ac6-4671-c7f2-8494-1114598834ae" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAc5ba574b-bab9-c8d1-f16f-3c4504ec6a29" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA43841974-19cb-35b2-de3c-3887e9d19b11" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr;">Hi Vince,</div>

<div style="direction: ltr;">for AUC experiments to work out really well, it is best if the sample is at chemical equilibrium. If the material changes during the run (e.g., aggregate or degrade), the s value continually changes and can't be fitted well, but

 for a small slice in time. So the question is not really where we equilibrate for temperature (the AUC instrument can be programmed to pre-incubate the same before the rotor is accelerated, as Reece pointed out), but the main question is for how long such

 that the incubation leads to chemical equilibrium. I don't think any of us actually knows the answer until we do the experiment. Therefore, I propose that we load the sample under ambient conditions and then program the instrument to pre-incubate at 37 C without

 spinning for 1 hour and then start the spin. We'll see what happens. If necessary, we can take a fresh sample and increase the incubation time in a second run, or we slice the resulting data into early, middle and late scans and analyze them individually.

 How does that sound? It would be a good start for this study, regardless of outcome.</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">-Borries</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Fri, Sep 8, 2023 at 9:44 AM Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA96b7a208-3fa9-deae-22eb-f253837ab5eb" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>

 wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Reece. I think that the best approach may be to heat the sample for an hour then run the centrifuge at 37°. Not sure what the best approach would be, i.e., to heat the sample initially outside the centrifuge or inside. I suppose that it depends on what is

 most convenient for you and/or what might have the least detrimental effect on the instrument. I think that once the sample starts to oligomerize that the process is essentially irreversible. Best, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAbce252cb-b8d4-6e57-6f06-bdc452b46fe8" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>><br>

<b>Sent:</b> Thursday, September 7, 2023 5:39 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAf6609611-eec4-39a9-2555-fba334e85d4e" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>; Gonzalez Socorro,

 Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAf09e1744-0139-c53c-0de5-739b2570aac9" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAd761c9f4-c80e-8617-6fb6-b4e2e39c5c89" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAd932ca0e-ec2e-411c-d448-404e7f7af7a5" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA7cc44885-996d-322d-41d8-66c0f1c86f2d" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Vince and Andres,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Thank you for your responses. I have everything that I need to run the first experiment. I will update once it is completed, and we can go from there.  </div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Vince, in regard to the higher temperature studies with CanA, the maximum temperature the instrument is capable of running at is 40 degrees Celsius. So, we could run the instrument at 37 degrees Celsius with the sample. However,

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">if we were expecting to see oligomerization as a result of heating to (or being held at) this temperature, then

</span>we would need to first incubate with calcium ions at 37 degrees Celsius. This could be achieved transiently through a heating block for an hour before sample loading, or more slowly via the AUC as it heats to 37 degrees Celsius over the course of roughly

 one hour (Bo, please correct me if this is wrong). The AUC then has a temperature-equilibration delay time which we can set. The timescale of the oligomerization would also need to be considered for the temperature-equilibration delay as significant oligomerization

 during the course of the AUC experiment would yield uninterpretable results. However, if it is the act of cooling to ambient temperature that induces oligomerization, then we would incubate at 37 degrees Celsius with calcium ions for an hour, allow the sample

 to cool to ambient temperature, and then run at ambient temperature. Perhaps you or Bo have better insight into which of these methods would be more suitable. If not, I can certainly try both. </div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">Cheers,</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">Reece</span></div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA62c73a29-01a5-9a71-6285-d615cd0a4ca2" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>><br>

<b>Sent:</b> 07 September 2023 12:58 PM<br>

<b>To:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA4288cdf0-7e8e-3646-ac89-494ae1732877" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>; Conticello, Vincent

 <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAaac94480-bbe8-c508-027e-6eb7883f1373" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAd251af90-d2ae-747b-908a-1749fdea4ab2" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA68cf4c57-412a-b7f9-40a8-f75fe5f94e9d" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAfb926837-e0b9-0e86-4170-b9f15ced5b06" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="padding: 2pt; border-width: 1pt; border-style: solid; border-color: rgb(100, 100, 100); background-color: rgb(255, 235, 156);">

<p style="direction: ltr; line-height: 12pt; margin: 5px;"><span style="font-size: 10pt; color: black;">Caution: This email was sent from someone

<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to

<a href="mailto:phishing@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA0145877e-39c6-3627-8ada-e92616e416b1" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly" style="margin-top: 0px; margin-bottom: 0px;">

phishing@uleth.ca</a>.</span></p>

</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi everyone,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

I just wanted to add the last details. I included some tubes containing the exact buffer in which the proteins are found and another tube with the buffer with no EDTA. In short, the proteins are in a low salt buffer solution (80mM NaCl, 50mM Tris/HCl pH= 7.5,

 9% glycerol and 0.01 mM EDTA) thus they all contain 0.01mM EDTA.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Let me know if anything else is needed.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Best,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Andres</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_x_appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_x_divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAbaccd5ab-dbb1-2a3a-5016-c746b3276aad" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>><br>

<b>Sent:</b> Thursday, September 7, 2023 2:44 PM<br>

<b>To:</b> Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA2c5afc24-a3cf-1284-bd73-80525895add7" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA76c46d9a-b8c6-1a87-a08f-4e1b9f8ae18b" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>>; Gonzalez

 Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA1a9f0d8a-7f8f-d5f0-b024-564b379ded69" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAd1f4d50c-76d3-0273-3802-4e53ceff0ed4" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAde5c35fc-a8e1-6db7-96fc-0140aee89919" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> Re: [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr;">This sounds good to me. Glad to hear the proteins were not damaged by the elevated temperature storage conditions. We will commence our studies using the samples you provided. The last thing we need to know is what the EDTA concentrations

 in the buffer are of the samples you provided to us.</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">-Borries</div>

<div style="direction: ltr;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr;">On Thu, Sep 7, 2023 at 10:55 AM Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA073eb0ab-467d-5f73-2670-ff9fda8208cb" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>>

 wrote:</div>

<blockquote style="margin: 0px 0px 0px 0.8ex; padding-left: 1ex; border-left: 1px solid rgb(204, 204, 204);">

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Reece. The samples should be good since the proteins are thermostable, that is, from a hyperthermophilic organism even though expressed in E. coli. Andres can answer the first part of your question regarding the buffers since he prepped the samples. For

 the initial experiments in the presence of calcium, the samples should be incubated at ambient temperature in the presence of calcium ion, probably for an hour. CanA might not oligomerize under these conditions, while the Hyper2 sample should. If the initial

 calcium experiments do not demonstrate oligomerization, the Hyper2 sample can be incubated for 24 hours at ambient temperature. I would not heat the Hyper2 sample since it might rapidly polymerize (based on our experience). With regard to the CanA sample,

 I would suggest using the 10 mM or maybe 20 mM calcium ion concentration at higher temperature. If we wanted to detect the presence of oligomers, we might not want to heat the sample to higher temperatures (typically we use 80C for filament formation followed

 by cooling to ambient to induce polymerization).I think that 37 degrees is a good compromise. Would you run the instrument with the sample at 37 or incubate at 37 and run the sample at ambient? If the latter, it may be best to start out at 1 hr incubation

 at elevated temp. Best, Vince</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Aptos, Aptos_EmbeddedFont, Aptos_MSFontService, Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_x_x_m_401497480420371704Signature">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_x_x_m_401497480420371704divtagdefaultwrapper" style="font-size: 12pt; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div><span style="font-size: 10pt;">Vincent P. Conticello, Ph.D.<br>

Professor<br>

Department of Chemistry<br>

Emory University</span></div>

</div>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_x_x_m_401497480420371704appendonsend">

</div>

<hr style="direction: ltr; display: inline-block; width: 98%;">

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_x_x_m_401497480420371704divRplyFwdMsg" dir="ltr">

<span style="font-family: Calibri, sans-serif; font-size: 11pt; color: rgb(0, 0, 0);"><b>From:</b> Martin, Reece <<a href="mailto:reece.martin@uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAdf6f4b53-d56e-0ea8-0292-c85fa419ba32" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">reece.martin@uleth.ca</a>><br>

<b>Sent:</b> Wednesday, September 6, 2023 7:11 PM<br>

<b>To:</b> Gonzalez Socorro, Andres <<a href="mailto:andres.gonzalez.socorro@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAab1c199b-f9ac-ecc1-fd1a-c7ff14f0fa84" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">andres.gonzalez.socorro@emory.edu</a>>;

 Conticello, Vincent <<a href="mailto:vcontic@emory.edu" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAf9befb58-afb7-2019-5a2d-a7453aa2d2cb" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">vcontic@emory.edu</a>><br>

<b>Cc:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAb13573bd-2d72-7852-89e8-6d4ed79638d4" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demeler@gmail.com</a>>;

<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA82085dff-1ca6-1a03-09e3-04d700b2757e" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">

demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWAf0d39bfd-38dd-6405-c960-40a0a01ac4cd" class="x_x_OWAAutoLink" data-loopstyle="linkonly">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>

<b>Subject:</b> [External] Analytical Ultracentrifugation Analysis of Cannula-mimetic Proteins</span>

<div> </div>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Hi Vince and Andres,</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

Considering that the samples arrived at room temperature (the exact length of time is unknown), and that an ice pack leaked (the samples appear to have been sealed properly). We are just looking to confirm that you feel it is worth continuing to process this

 batch of samples, taking into account your insight into the temperature-stability of the proteins at ambient temperature. </div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

If so, as per the updated experimental design in the LIMS, we will start out running both<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);"> CanA and Hyper2</span> at a high and low concentration in the EDTA-containing buffer at 20 degrees Celsius. To accomplish

 this, I need to know w<span style="background-color: rgb(255, 255, 255);">hat buffer each of the protein stocks are in and whether or not they contain EDTA. </span></div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

If this experiment is successful, we will repeat in the presence of calcium ions (10mM for CanA, and 1mM for Hyper2). For this we need to know at what temperature and for how long the samples should be incubated with the CaCl2 solution. Finally, if this experiment

 is successful, we will look at repeating with increased calcium ion concentrations, as well as running at a higher temperature such as 37 degrees Celsius.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

I'll report back on the results from the first run, which will take place this week.</div>

<div style="direction: ltr; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">

<br>

</div>

<div id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722x_x_x_x_x_m_3422050475750038309x_x_m_8285551558980493547x_m_-8799108655217816373m_355736180989486454x_m_-1539958962431188717x_m_-2490480221605927010x_x_x_m_401497480420371704x_Signature">

<div style="direction: ltr; margin: 0px;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">Cheers,</span></div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px;"><br>

</div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 12pt; color: rgb(0, 0, 0);">Reece</span></div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 15px; color: rgb(50, 49, 48);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: black; background-color: rgb(255, 255, 255);"><br>

</span></div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; font-family: Calibri, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 15px; color: rgb(50, 49, 48);">

<span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">--</span></div>

<div style="margin: 0px; background-color: rgb(255, 255, 255);">

<div style="direction: ltr;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">Reece Martin, B.Sc</span></div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; background-color: white;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">M.Sc. Candidate</span></div>

</div>

<div style="margin: 0px; background-color: white;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">Northwest Biophysics Consortium</span></div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; background-color: white;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">Alberta RNA Research and Training Institute (ARRTI)</span></div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; background-color: white;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">Lab of Dr. Borries Demeler</span></div>

<div style="direction: ltr; margin: 0px; background-color: white;"><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">Department of Chemistry and Biochemistry</span><span style="font-family: verdana, sans-serif; font-size: 10px; color: black;"><br>

</span><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">University of Lethbridge</span></div>

<div><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">Email: reece.martin@<a href="http://uleth.ca/" id="x_x_x_x_x_x_x_m_7432567777597268943x_x_m_4183687896679021722OWA4595087d-40cd-e111-e299-dd0447534ad7" class="x_x_OWAAutoLink" shash="C5jj0gKsO/FbWU5XkfFhdUQJ15frpcrfoGsVO0K4HtFEi8QWG2L3LrHSCbth0XxWtU7YtTbPoADIyctZxI9H8mrzsR7Dandf4BN1IuV91hikqh35n2Xk2jNN4EMPBww+gD3JLw7finlP0uq09hHpE1VBku/TCzjO6o3RhQy208I=" originalsrc="http://uleth.ca/" data-auth="VerificationFailed" data-loopstyle="linkonly">uleth.ca</a></span></div>

<div><span style="font-family: Calibri, Helvetica, sans-serif; font-size: 9pt; color: rgb(0, 0, 0); background-color: rgb(255, 255, 255);">Phone: 403-498-5882</span></div>

</div>

</blockquote>

</blockquote>

</blockquote>

<div style="direction: ltr;"><LowSaltBufferwithEDTA_contaminant.jpg></div>

<div style="direction: ltr;"><LowSaltBufferwithNOEDTA_contaminant.jpg></div>

</blockquote>

</blockquote>

</blockquote>

</blockquote>

</blockquote>

</blockquote>

</body>

</html>