<div dir="ltr">Hi Jyoti,<div>the microfuge test is just a quick and easy to perform test for aggregation you can do with a benchtop spectrophotometer, if you are worried about aggregation. It is not essential to do this for an AUC experiment, because AUC does the same thing at much higher resolution. So feel free to skip it, but you may be able to figure out beforehand if it makes sense to test a sample by AUC, unless you test it beforehand.</div><div><br></div><div>I hope that clears up your doubts.</div><div>Regards, -Borries</div></div><br><div class="gmail_quote"><div dir="ltr" class="gmail_attr">On Wed, Dec 13, 2023 at 7:28 AM Baranwal, Jyoti <<a href="mailto:baranwal@uthscsa.edu">baranwal@uthscsa.edu</a>> wrote:<br></div><blockquote class="gmail_quote" style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex"><div class="msg-2107813248750681038">




<div dir="ltr">
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Dear Dr. Demeler,</div>
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
Good morning!</div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">Thank you for your comprehensive details related to experiments. I will perform the
 requisite, measure the OD, </span><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:16px;font-weight:400;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">make
 an account,</span><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)"> and will upload as well. </span></div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">There is an important information I would like to share with you, I have never seen
 any visible precipitate or turbidity in any buffer conditions for this protein, and the 8 different buffer and salt conditions I have mentioned in my previous email have shown good peak
</span><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:16px;font-weight:400;color:rgb(0,0,0);background-color:rgb(255,255,255)">when I performed</span><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)"> for
 SEC-MALS. The buffers where it wasn't very well behaving are in very low salt conditions which I haven't sent you the details of yet. I am planning to try these buffers only if these 8 buffer conditions don't work. </span></div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">I would like to clarify a doubt I have; would you want me to perform aggregation test
 for these 8 buffers I have mentioned (where I haven't seen any sign of precipitation)? Because in my experience this protein is pretty stable in these buffers and, we only want to see if there is any oligomeric state. However, if it helps in performing AUC,
 I will be happy to check aggregation in all the buffers.</span></div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">My sincere appreciation,</span></div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">With best regards,</span></div>
<div><span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">Jyoti Baranwal</span></div>
<div id="m_-2107813248750681038appendonsend"></div>
<hr style="display:inline-block;width:98%">
<div id="m_-2107813248750681038divRplyFwdMsg" dir="ltr"><font face="Calibri, sans-serif" style="font-size:11pt" color="#000000"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" target="_blank">demeler@gmail.com</a>><br>
<b>Sent:</b> Tuesday, December 12, 2023 4:17 PM<br>
<b>To:</b> Baranwal, Jyoti <<a href="mailto:baranwal@uthscsa.edu" target="_blank">baranwal@uthscsa.edu</a>><br>
<b>Cc:</b> Gupta, Yogesh K <<a href="mailto:GuptaY@uthscsa.edu" target="_blank">GuptaY@uthscsa.edu</a>>; <a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" target="_blank">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a> <<a href="mailto:demelerlab@biophysics.uleth.ca" target="_blank">demelerlab@biophysics.uleth.ca</a>><br>
<b>Subject:</b> Re: AUC (sedimentation equilibrium experiments)</font>
<div> </div>
</div>
<div>
<div style="padding:0.1em;background-color:rgb(255,255,200)"><span style="font-size:12pt;font-family:Calibri,Helvetica,Arial,sans-serif;color:rgb(255,102,0);font-weight:bold">*EXTERNAL EMAIL*</span>
</div>
<br>
<div>
<div dir="ltr">
<div dir="ltr">Hello Jyoti,</div>
<div>Thanks for the details in your message. It sounds like you may have some issues with aggregation in certain buffers. There is a very simple test you can do if you think this is an issue:</div>
<div><br>
</div>
<div>1. measure the absorbance spectrum of your protein from ~ 220-600 nm. If you see non-zero absorbance above 300 nm, you likely have aggregation.</div>
<div>2. put your protein solution in a benchtop microfuge and spin for 3-4 minutes. Carefully aspirate the supernatant and re-measure the absorbance as above. If the absorbance is noticeably lower, then you lost material due to aggregation. Also, make sure
 the non-zero absorbance >300 nm is gone. That portion is your aggregate.</div>
<div><br>
</div>
<div>If the buffers below produce no aggregate, then we can help you measure reversible oligomerization. I am not familiar with MBis, but I do believe acetate buffers absorb below 240 nm, so there we need to know how much. The PBS buffer should not absorb at
 all in this range if it is clean. The TRIS buffers should be fine as well, as long as you use optical grade TRIS. Also, 50 mM is probably more than you need, so you could go down to 10-15 mM TRIS without losing buffering capability for a low concentration
 protein. For the acetate buffers I suggest to go to low enough concentration to maintain an absorbance of < 0.3 OD at the lower wavelength where you will want to measure the lower protein concentrations.</div>
<div><br>
</div>
<div>It would be good if you could collect buffer absorbance profiles and send them to us for review so we can ascertain optimal conditions.</div>
<div><br>
</div>
<div>How much protein do you have available to make these measurements? I would suggest we measure 0.3 OD at 230 nm, and 0.7 OD at 285 nm for each buffer so we can get a good spread of concentrations. Can you please calculate the molar concentrations at these
 wavelengths and send them to us? You can get a molar extinction coefficient for 280 nm if you upload the sequence into UltraScan's analyte management tool - Yogesh should know how to do that, or we can do it for you.</div>
<div><br>
</div>
<div>Please create a LIMS account on our server so we can track this project at this address:</div>
<div><a href="https://uslims.uleth.ca/uslims3_CCH/newaccount.php" target="_blank">https://uslims.uleth.ca/uslims3_CCH/newaccount.php</a></div>
<div>Once you created the account, please check your e-mail for an activation link and a temporary password. You can update it after logging in under "Change my info". Next, please submit a project request ("Projects" button in the left bar), and answer questions
 in the form as best as you know. Leave the experimental design section blank, we will fill this in. Don't forget to include the protein sequence and buffer components. You can also upload PDF documents or images with the absorbance spectra to our LIMS server
 by clicking on "Supporting Files".</div>
<div><br>
</div>
<div>Once this information is uploaded, we will work out a design and we can schedule a zoom call to discuss these experiments further.</div>
<div><br>
</div>
<div>Regards, -Borries</div>
<div><br>
</div>
<div dir="ltr"><br>
</div>
<div>
<blockquote style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex">
<div>
<div dir="ltr">
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
I have used a list of buffers to check its oligomeric state of the protein using SEC-MALS. However, there could be possible that salt bridges between the protein is not stable in the SEC-MALS, that's why we aren't able to observe the dimer/oligomeric state
 of the protein and only get the peak for monomer. We have observed some fraction of protein at higher oligomer when we have lowered the salt concentration in the buffer, but protein seem to be unstable. </div>
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
We think that AUC would be very helpful to understand the oligomeric state of this protein. Therefore, we want to try different pH, and salt concentration.  We can couple this with multiple concentration of protein, as you have suggested.  </div>
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
I have made a list of buffers we would like to try with this protein (listed below). All the buffer solution has only buffering agent and salt in it. There is no other compound which will hinder absorbance.</div>
<ol start="1" style="list-style-type:decimal">
<li style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">200 mM LiSO4 100 mM Sodium acetate pH 4.5</span></li><li style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">50mM Tris-HCl 50mM KCl pH7.5</span></li><li style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">1x PBS</span></li><li style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">25mM Sodium acetate 100 mM NaCl pH 4.5</span></li><li style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<span style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">25mM MES 100mM NaCl pH 5.5</span></li><li style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">
<span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">25mM MBis-Tris 100mM NaCl pH 6.5</span></li><li style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">
<span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">25mM Tris-HCl 100mM NaCl pH 7.5</span></li><li style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">
<span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">25mM Tris-HCl 100mM NaCl pH 8.5</span></li></ol>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">On SEC-MALS I have tried two different concentrations 8 mg/ml and 13 mg/ml and
 40 ul. To begin with we can start with these buffers and check the oligomeric state if required I have few more buffers to try. We can start with low concentrations of protein and then move to higher concentration. At this stage I can't comment on what concentration
 we can use for AUC. But what I can say at this point, I have used 200 nM protein on Mass spectrometer it did suggest that it is dimer, but this had a limitation of 30 kDa and because my protein is approx. 19.5 kDa we could not see monomers. Based on the sensitivity
 of AUC we can decide on the concentration.</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">Thank you for your time and consideration!</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">With best regards,</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)">Jyoti Baranwal</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div><span style="letter-spacing:normal;font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;font-weight:400;color:rgb(0,0,0)"><br>
</span></div>
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div style="font-family:Aptos,Aptos_EmbeddedFont,Aptos_MSFontService,Calibri,Helvetica,sans-serif;font-size:12pt;color:rgb(0,0,0)">
<br>
</div>
<div id="m_-2107813248750681038x_m_-8734498624565699744Signature">
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0)"><span style="font-size:9pt;color:rgb(12,100,192)"><b>Postdoctoral Researcher</b></span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0)"><span style="font-size:9pt;color:rgb(12,100,192)"><b>Gupta Lab</b></span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0)"><span style="font-size:9pt;color:rgb(12,100,192)"><b>Greehey Children's Cancer Research Institute (GCCRI)</b></span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0)"><span style="font-size:9pt;color:rgb(12,100,192)"><b>University of Texas Health Science Center at San Antonio</b></span></div>
<div style="font-family:Calibri,Arial,Helvetica,sans-serif;color:rgb(0,0,0)"><span style="font-size:9pt;color:rgb(12,100,192)"><b>Email:
<a href="mailto:baranwal@uthscsa.edu" target="_blank">baranwal@uthscsa.edu</a></b></span></div>
</div>
<div id="m_-2107813248750681038x_m_-8734498624565699744appendonsend"></div>
<hr style="display:inline-block;width:98%">
<div id="m_-2107813248750681038x_m_-8734498624565699744divRplyFwdMsg" dir="ltr"><font face="Calibri, sans-serif" color="#000000" style="font-size:11pt"><b>From:</b> Borries Demeler <<a href="mailto:demeler@gmail.com" target="_blank">demeler@gmail.com</a>><br>
<b>Sent:</b> Monday, December 11, 2023 3:34 PM<br>
<b>To:</b> Gupta, Yogesh K <<a href="mailto:GuptaY@uthscsa.edu" target="_blank">GuptaY@uthscsa.edu</a>><br>
<b>Cc:</b> Baranwal, Jyoti <<a href="mailto:baranwal@uthscsa.edu" target="_blank">baranwal@uthscsa.edu</a>><br>
<b>Subject:</b> Re: AUC (sedimentation equilibrium experiments)</font>
<div> </div>
</div>
<div>
<table border="0" cellspacing="0" cellpadding="0" width="100%" align="left" style="border:0px;display:table;width:100%;table-layout:fixed;float:none">
<tbody style="display:block">
<tr>
<td valign="middle" width="1px" bgcolor="#A6A6A6" cellpadding="7px 2px 7px 2px" style="padding:7px 2px;background-color:rgb(166,166,166)">
</td>
<td valign="middle" width="100%" bgcolor="#EAEAEA" cellpadding="7px 5px 7px 15px" color="#212121" style="width:100%;background-color:rgb(234,234,234);padding:7px 5px 7px 15px;font-family:wf_segoe-ui_normal,"Segoe UI","Segoe WP",Tahoma,Arial,sans-serif;font-size:12px;font-weight:normal;color:rgb(33,33,33);text-align:left">
<div>You don't often get email from <a href="mailto:demeler@gmail.com" target="_blank">
demeler@gmail.com</a>. <a href="https://aka.ms/LearnAboutSenderIdentification" target="_blank">
Learn why this is important</a></div>
</td>
<td valign="middle" align="left" width="75px" bgcolor="#EAEAEA" cellpadding="7px 5px 7px 5px" color="#212121" style="width:75px;background-color:rgb(234,234,234);padding:7px 5px;font-family:wf_segoe-ui_normal,"Segoe UI","Segoe WP",Tahoma,Arial,sans-serif;font-size:12px;font-weight:normal;color:rgb(33,33,33);text-align:left">
</td>
</tr>
</tbody>
</table>
<div>
<div style="padding:0.1em;background-color:rgb(255,255,200)"><span style="font-size:12pt;font-family:Calibri,Helvetica,Arial,sans-serif;color:rgb(255,102,0);font-weight:bold">*EXTERNAL EMAIL*</span>
</div>
<br>
<div>
<div dir="ltr">
<div dir="ltr">Hi Yogesh,
<div>thanks for your message! Yes, this sounds very interesting, so we are interested in testing the effect of pH on the kd and the oligomeric state?</div>
<div>I suggest we measure multiple concentrations, perhaps varying 5-20 fold, above and below the putative kd concentration, at each pH you want to test. Any chance we can access wavelengths around 225-230 nm without buffer background? Any buffer component
 that absorbs should be kept to a minimum concentration so we don't saturate the dynamic range of the detector.</div>
<div><br>
</div>
<div>For each sample, we would need about 0.5 ml volume, optical densities at each wavelength should ideally be between 0.3-0.7 OD.</div>
<div><br>
</div>
<div>Before we proceed we should have a meeting with our AUC lab members and discuss this research a bit further.</div>
<div><br>
</div>
<div>Thanks! -Borries</div>
</div>
<br>
<div>
<div dir="ltr">On Sat, Dec 9, 2023 at 4:51 PM Gupta, Yogesh K <<a href="mailto:GuptaY@uthscsa.edu" target="_blank">GuptaY@uthscsa.edu</a>> wrote:<br>
</div>
<blockquote style="margin:0px 0px 0px 0.8ex;border-left:1px solid rgb(204,204,204);padding-left:1ex">
<div>
<div lang="EN-US">
<div style="border:1pt solid rgb(100,100,100);padding:2pt;background:rgb(255,235,156)">
<p style="line-height:12pt;margin:5px"><b><span style="font-size:10pt;color:rgb(156,101,0)"></span></b><span style="font-size:10pt;color:black">Caution: This email was sent from someone
<b>outside of the University of Lethbridge</b>. Do not click on links or open attachments unless you know they are safe. Suspicious emails should be forwarded to
<a href="mailto:phishing@uleth.ca" target="_blank">phishing@uleth.ca</a>.<u></u><u></u></span></p>
</div>
<br>
<div>
<div>
<p>Hi Borries,<u></u><u></u></p>
<p><u></u> <u></u></p>
<p>I hope you are doing well. Jyoti (cc’ed) is a postdoc in my lab who solved the crystal structure of a phosphatase/RNA de-capping enzyme (monomeric molecular mass = ~20 kDa). We observed a dimer in the crystals. Using the sedimentation equilibrium method,
 we want to check its oligomeric state in solution at different pH  (4.5 – 8.5). Would you be interested in this collaboration? We learned that our AUC in RAB is down, so we didn’t attempt these experiments. We thought you might be interested in this project.<u></u><u></u></p>
<p><u></u> <u></u></p>
<p>Best,<u></u><u></u></p>
<p><u></u> <u></u></p>
<p>Yogesh<u></u><u></u></p>
<p><u></u> <u></u></p>
<p><span style="font-size:11pt">Yogesh Gupta, Ph.D.<br>
Associate Professor<br>
University of Texas Health Science Center at San Antonio<u></u><u></u></span></p>
<p><span style="font-size:11pt">Department of Biochemistry and Structural Biology<u></u><u></u></span></p>
<p><span style="font-size:11pt">Greehey Children's Cancer Research Institute<br>
8403 Floyd Curl Drive, MC7784<u></u><u></u></span></p>
<p><span style="font-size:11pt">San Antonio, TX, 78229, USA<br>
Phone: 210-562-9064<a href="http://voice.google.com/calls?a=nc,%2B12105629064" rel="noopener" title="Call +1 210-562-9064 via Google Voice" target="_blank"></a><a href="http://voice.google.com/calls?a=nc,%2B12105629064" rel="noopener" title="Call +1 210-562-9064 via Google Voice" target="_blank"></a><br>
<a href="http://ccri.uthscsa.edu/YGupta.html" target="_blank"><span style="color:rgb(5,99,193)">Gupta Lab</span></a></span><u></u><u></u></p>
</div>
</div>
</div>
</div>
</blockquote>
</div>
</div>
</div>
<br>
<div style="padding:0.1em;background-color:rgb(255,255,200)"><span style="font-size:12pt;line-height:12pt;font-family:Calibri,Helvetica,Arial,sans-serif"><span style="font-weight:bold">CAUTION:
</span>This message originated outside of UT Health San Antonio. Please exercise caution when clicking on links or opening attachments.</span>
</div>
</div>
</div>
</div>
</div>
</blockquote>
</div>
</div>
</div>
<br>
<div style="padding:0.1em;background-color:rgb(255,255,200)"><span style="font-size:12pt;line-height:12pt;font-family:Calibri,Helvetica,Arial,sans-serif"><span style="font-weight:bold">CAUTION:
</span>This message originated outside of UT Health San Antonio. Please exercise caution when clicking on links or opening attachments.</span>
</div>
</div>
</div>

</div></blockquote></div>